Diabetologia：激活但功能受損的記憶Tregs在1型糖尿病患者進展緩慢的過程中會逐漸擴展

從第一次消失口內自身抗纖到消失1HG冠心病病理征狀的令人滿意率在成年人一時期就有不錯的揭示，多個口內自身抗纖陰性的成年人當中有70%在血清轉換后10年內身患冠心病，而隨訪15年的成年人這一比重增大到84%。值得注意，占病理1HG冠心病一半以上的HG1HG冠心病的肺癌選擇性還沒有獲得必要的透徹研究。

不夠多的人開始常用再行系統來定義1HG冠心病的令人滿意：個纖在消失多種口內自身抗纖時帶入第1收尾，消失血糖異常時帶入第2收尾，消失征狀時帶入第3收尾。一些多發口內自身抗纖陰性的個纖，在1期和2期，令人滿意較遲，并其發展為肺癌的1HG冠心病。我們此前揭示了一分組在首次檢驗到多種口內自身抗纖樣本后多于10年無冠心病的極遲令人滿意者，這分組病患人數少，但相似性不夠加明確。隨后，我們發現口內自身淋巴細胞膜特異性CD8+T細胞膜反應在令人滿意較遲的病患當中大體不存有，但在未來會肺癌和長期存有的冠心病病患當中很容易檢驗到。這顯然表明，與令人滿意病患相比，這些病患致病反應的調節增強。

20世紀于數，盡管調節性T細胞膜(Treg)使用量較長時間，但冠心病病患存有一些動態缺陷，其當中都有對IL-2的反應并能下降。此外，冠心病病患當中的effectCD4+T細胞膜顯然對調節不夠具抵抗性，展現為effectT細胞膜的誘發減弱，自然激發的Treg和纖外激發的誘導Treg，以及淋巴細胞膜境況的CD4+T細胞膜當中IL-2反應減弱。本透徹研究的意在是揭示了CD4+調節性T細胞膜(Treg)在一小群極較遲令人滿意者當中的相似性，他們的平均年紀為43歲(31-72歲)，隨訪時間為18-32年。

作法：BOX透徹研究是一項以人群為基礎的縱向透徹研究，在21歲表列出患病的病患親族當中檢查1HG冠心病的危險因素。我們此前揭示了長期較遲令人滿意者的相似性，他們保持良好多重口內自身抗纖陰性超過10年，但沒有消失冠心病的病理征狀，遲性或非開展性致病。隨后，10名繼續保持良好無冠心病并不想提供大量體內樣本的較遲令人滿意者納入T和B細胞膜動態透徹研究。在目前的透徹研究當中，8名遲令人滿意者(SP分組)，當中位年紀43歲(31-72歲)，18 - 32歲彼此間的口內自身抗纖陰性。所有的參與者都西北面1HG冠心病令人滿意的1期，盡管一些人隨后保住了口內自身抗纖對某些淋巴細胞膜的陰性反應，然而，一名病患已經西北面2期多于6年，但沒有消失病理征狀，一名病患被臨床為冠心病，該受試者72歲，在采集科學研究樣本時，其HbA1c增大到53 mmol/mol(7%)，在研究小分組當中對該供纖開展了單獨審計。分離外周血單個核細胞膜(PBMCs)，使用多常量流式細胞膜忍術和T細胞膜誘發試驗審計供纖當中Treg的振幅、性狀和動態。常用FlowSOM和CITRUS(聚類解剖、并不一定和回歸)開展無監督聚類透徹研究，審計Treg性狀。

結果：與肥胖癥供纖相比，來自遲令人滿意纖的思緒CD4+T細胞膜的監督聚類說明了，激活的思緒CD4+ Treg振幅增大，與糖皮質激素誘導的TNFR特別細胞(GITR)表示增大有關。一名HbA1c增大的病患與令人滿意較遲者和轉換的解讀分組相比，Treg序有所相異。動態于數，與肥胖癥供纖相比，來自較遲令人滿意纖的Treg介導的CD4+effectT細胞膜誘發輕微受到影響。展現為對effectCD4+T細胞膜CD25和CD134表示的誘發增大。

布1 透徹的性狀透徹研究說明了，CD4+Treg亞HG在遲令人滿意緩沖區當中增大。由FlowSOM作用于的Treg室，有數在來自所有供纖的活CD4+CD45RA -細胞膜上。根據標上物表示解剖出10個元簇:思緒T細胞膜_1;思緒T cell_2;思緒T cell_3;思緒T cell_4;CD49b思緒T細胞膜;HLA-DR + GITR +思緒T細胞膜;寄存器Treg_1;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;和寄存器Treg_4。(a)常用9個相異Treg標上作用于的10個元簇的MST。每個鏈表都有一個集群(100個集群)，不夠大的元集群(10個元集群)在鏈表分組外圍上色。每個鏈表當中的餅布聲稱單個標上的表示級別。(b)每個元聚類的熱布，以說明了整纖標上表示。(c, d)為HD分組(c)和SP分組(d)作用于布，以及FlowSOM比對的每個元簇的很薄。(e-l)比起豐度為每個metacluster盒3](豐度> 0.05%)確定為HD和SP分組:寄存器Treg_2 (e),寄存器Treg_3 (f),寄存器Treg_4 (g), HLA-DR + GITR +思緒T細胞膜(h)、思緒T cell_1(i),思緒T cell_2 (j),思緒T cell_3 (k) n d CD49b思緒T細胞膜(l)。綠色帶子都有捐贈者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符號秩檢驗。此鍵適用于布形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

布2 常用CITRUS的預測模HG證實，Treg振幅的增大是令人滿意較遲的標志。分級依賴型(a - f)和橄欖透徹研究(g-k)相當SP參與者和轉換的HD參與者在CD4+CD45RA?T細胞膜上的區別。(a)親本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纖的都有性布。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通過HLA-DR和GITR表示開展分離，建模FlowSOM群纖。(b) HD(黑點)和SP(雜色)分組以及供纖SP 606(綠色)當中CD25+ cd127的振幅統計布。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+依賴型子集的盒3];(c) HLA-DRloGITR?(寄存器Treg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(寄存器Treg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(寄存器Treg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+寄存器T cell)。(g - i)柑桔簇螺旋狀由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表示強度著色，箭頭突出的簇被比對為SP和HD緩沖區彼此間的相異。(j)盒3]說明了了在SP(雜色)和HD(灰點)分組當中，CITRUS思緒Treg_3和Treg_4的比起豐度(比重)。(k)直方布說明了每個簇的性狀(粉紅色)和Treg標上比起表示與氛圍表示(紅色);上列，寄存器Treg_3;下面一行，寄存器Treg_4。氛圍與所有其他簇當中標上的表示有關。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符號秩檢驗

布3 與肥胖癥獻血者相比，令人滿意較遲者思緒treg的GITR增大。每個思緒CD4+T細胞膜元簇(思緒T細胞膜_1;思緒T cell_2;思緒T cell_3;CD49b +思緒T細胞膜;HLA-DR + GITR +思緒T細胞膜;寄存器Treg_2;寄存器Treg_3;來自FlowSOM的memory Treg_4)檢驗每個表示標上的發生變化。(a,b)來自HD (a)和S (b)緩沖區的表示熱布(sp606不都有在內)。(c,d)思緒Treg_4元簇當中所有HD(灰色)、所有SP(紅色)和SP 606(綠色)的FlowSOM GITR表示串聯，說明了直方布(c)和統計布(d)。Wilcoxon匹配符號秩和檢驗，p< 0.07(綠色)所有供纖都有，p< 0.05(紅色)供纖SP 606和轉換的HD不都有在測試當中。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs當中GITR表示，從分級依賴型，從所有HD(灰色)、所有SP(紅色)和SP 606(綠色)串聯，說明了直方布(e)和統計布(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符號秩檢驗

布4 來自較遲令人滿意的CD4+ treg細胞膜控制effectCD4+T細胞膜的并能下降。SP分組用紅色的本站和帶子聲稱，HD分組用紅色的本站和帶子聲稱，綠色的本站/帶子聲稱供纖sp606。常用CD4+CD25+ Treg分選試劑盒對CD4+T細胞膜開展分選。CD4+CD25?(這樣的話者)被標上為CFSE, Treg按捕捉到的比重校準。用抗CD3 /28微珠再造細胞膜，培育出3當晚開展流式細胞膜忍術檢驗。(a-d)與CD4+這樣的話者比起應的treg培育出(自纖)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg與HD這樣的話者培育出。(a,b,f) CFSE再生(a,e)和CFSE誘發平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的誘發平均值。常用陰性解讀(激活的響應細胞膜分別為treg)計算誘發平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重復測量雙向方差透徹研究。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相當測試

布5 effectCD4+T細胞膜對較遲令人滿意的T細胞膜再造的誘發不夠敏感。SP分組用紅色的本站和帶子聲稱，HD分組用紅色的本站和帶子聲稱，綠色的本站/帶子聲稱供纖sp606。常用CD4+CD25+Treg分選試劑盒對CD4+T細胞膜開展分選。CD4+CD25?(這樣的話者)被cfsel標上，treg按捕捉到的比重校準。用抗CD3 /28微珠再造細胞膜，培育出3當晚開展流式細胞膜忍術(CD25反染)和細胞膜因子透徹研究。HD Treg與HD、SP或sp606這樣的話者共同完成培育出。(a,b) CFSE再生(a)和CFSE誘發百分比(b)。(c,d) CD25誘發百分比(c)和CD134誘發百分比(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培育出當中的表示。***p< 0.001， **p< 0.01，重復測量雙向方差透徹研究。?p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重相當測試

論斷：我們得出的論斷是，來自較遲令人滿意子的再造思緒CD4+Treg在GITR表示當中獲得了擴展到和豐富，強調了進一步透徹研究Treg在1HG冠心病危險性個纖當中的異質性的合理性。

標題出處：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28